Xây dựng quy trình Realtime RT - PCR xác định mRNA vi khuẩn lao Mycobacterium tuberculosis

Tóm tắt

Hiện nay, việc đánh giá hiệu quả điều trị vi khuẩn lao chủ yếu dựa vào phương pháp nuôi cấy. Chính tốc độ mọc rất chậm của Mycobacterium tuberculosis (MTB) làm ảnh hưởng đến ý nghĩa sử dụng kết quả này trong lâm sàng. Chính vì vậy, một phương pháp phát hiện nhanh chóng, chính xác để phát hiện sự đáp ứng của vi khuẩn lao với thuốc điều trị là rất cần thiết. Chúng tôi vừa xây dựng quy trình realtime RT-PCR sử dụng mẫu dò thủy giải Taqman trên mRNA đích antigen 85B (α antigen). Bước đầu, quy trình vừa xây dựng được sử dụng, kết hợp với nhuộm soi đàm và Realtime PCR dựa trên DNA đích IS6110 và 16SrRNA gen, thử nghiệm trên 30 mẫu bệnh phẩm đàm thu nhận từ các bệnh nhân lao đang trong quá trình điều trị. Có 8 mẫu cho kết quả âm tính hoàn toàn đối với cả ba phương pháp. Phương pháp vừa mới xây dựng phát hiện 9 trong tổng số 22 mẫu dương phát hiện bằng Realtime PCR. Có thể kết luận về 9 trường hợp dương tính với Real-time RT-PCR là trong mẫu bệnh phẩm vẫn còn vi khuẩn lao sống và dự đoán bệnh nhân chưa đáp ứng tốt với phác đồ điều trị. Mặt khác, phương pháp Real-time PCR cho kết quả dương tính nhiều hơn Real-time RT-PCR 13 trường hợp. Có thể thấy rằng Real-time PCR không phân biệt được vi khuẩn lao sống hay chết. Quy trình Real-time RT-PCR hoàn toàn có thể sử dụng nhằm theo dõi hiệu quả của quá trình điều trị bệnh lao.